4.3 Используя веб-сайт Администратора и/или предоставляя Администратору свои персональные данные, пользователь веб-сайта дает согласие на обработку своих персональных данных в соответствии с положениями Регламента.
Иммуногистохимия
Иммуногистохимия или иммуногистохимический анализ — это тест, в котором используются антитела для обнаружения специфических молекул в образцах тканей. Этот метод диагностики широко используется в онкологии.
Некоторые теоретические и исторические аспекты. Иммунная система использует специальные молекулы — антитела — для распознавания и уничтожения чужеродных веществ. Они специфичны: каждое антитело может быть строго связано с определенным антигеном. В 1941 году Альберт Кунс, американский иммунолог, стал пионером в использовании антител в лаборатории для «распознавания» белков в бактериях. В 1984 году аргентинский биохимик Сезар Мильштейн получил Нобелевскую премию за создание гибрида раковой клетки и лимфоцита, способного синтезировать моноклональные антитела. Затем последовало производство моноклональных антител для диагностических и терапевтических целей. В 1994 году С. Тейлор применил иммуногистохимический анализ при исследовании 20 000 опухолей и обнаружил, что в половине случаев диагнозы были неверными. Иммуногистохимия зарекомендовала себя как эффективный метод диагностики.
Какие задачи в онкологии помогает решать иммуногистохимия?
- Отнести злокачественную опухоль к тому или иному типу.
- Выяснить, в каких генах опухолевых клеток произошли мутации, какие белки способствуют прогрессированию рака.
- Выявить первичную опухоль и ее метастазы.
- Определить, произошла ли злокачественная трансформация клеток.
- Определить прогноз для пациента.
- Разобраться, поможет ли в данном случае таргетная терапия.
- Определить, чувствительны ли опухолевые клетки к химиотерапии, лучевой терапии.
Иммуногистохимия может быть прямой или непрямой. В первом случае используется тип антител, которые должны связываться с конкретной молекулой-мишенью. Когда молекула-мишень присутствует в ткани и реакция произошла, раковая ткань окрашивается:
- Чаще всего к антителу присоединяют фермент, например, пероксидазу. Этот фермент катализирует химическую реакцию, которая приводит к изменению цвета.
- Иногда к антителу присоединяют флюоресцин или родамин, при этом окрашивание выявляют с помощью флюоресцентной микроскопии.
- всего применяют непрямую иммуногистохимию. При этом используют два антитела. Одно соединяется с антигеном, второе — с полученным комплексом антиген-антитело. Маркер, который вызовет изменение цвета, связывают со вторым антителом.
Косвенный метод имеет некоторые преимущества:
- Он обладает более высокой чувствительностью, потому что с одним первичным антителом (тем, которое связывается с белком-мишенью) может связаться несколько вторичных антител.
- Исследование занимает немного времени: для того, чтобы произошла реакция, нужно примерно 3 часа.
- Непрямая иммуногистохимия требует небольшого количества антител. Например, вторичное антитело, направленное на иммуноглобулины кролика, будет реагировать на любое первичное антитело «кроличьего» происхождения. Не нужно создавать много разных видов вторичных антител с окрашивающей или флуоресцентной меткой.
Как проводят исследование?
Для проведения иммуногистохимического анализа необходимо получить опухолевую ткань, т.е. взять биопсию. Материалом может быть столбик ткани, взятый во время трефинационной биопсии, фрагмент ткани или даже целый орган, удаленный во время операции.
Образец ткани стабилизируется формальдегидом (иногда также используются метанол, ацетон или другие стабилизаторы — это зависит от того, какой антиген необходимо определить и реагирует ли он с этими или другими стабилизаторами) и погружается в парафин. Парафинизация помогает сохранить ткани, сохраняя их структуру в течение длительного периода времени.
Затем парафинированную ткань разрезают на срезы толщиной 3-5 мкм с помощью специального микротома. Эти тонкие ломтики помещаются на стекло, покрытое специальным клеем.
Некоторые образцы очень чувствительны к реагентам, используемым в описанной выше процедуре. Их не следует класть на парафин. Эти ткани замораживаются жидким азотом. Этот альтернативный метод используется редко и только при необходимости, поскольку замораживание имеет определенные недостатки: изображение под микроскопом становится не таким четким, а образцы приходится хранить в специальных условиях. В этих случаях ткани фиксируются ацетоном или формальдегидом после того, как образцы были помещены на стекло и разморожены.
После того, как срезы помещены на стекло, с них необходимо удалить весь воск, иначе антитела не смогут прореагировать с антигеном. Этот процесс называется депарафинизацией. Для этого используется ксилол. Затем проводятся другие подготовительные процедуры, чтобы антитела могли успешно реагировать с нужными антигенами, и, наконец, проводится непосредственно иммуногистохимический анализ. Ткань, обработанная антителом, исследуется под микроскопом, чтобы определить, окрасилась ли она.
Иммуногистохимическое исследование (ИГХ)
Иммуногистохимия или иммуногистохимия (сокращенно ИГХ) — это анализ, используемый для диагностики различных заболеваний и особенно широко распространенный в онкологии. Он используется для обнаружения маркеров — веществ (белков), которые вырабатываются раковыми клетками в больших количествах. Это помогает врачам в решении различных диагностических задач.
Суть IHC-теста заключается в том, что в образец раковой ткани добавляются антитела, которые распознают рассматриваемое вещество как антиген и связываются с ним. Это гарантирует, что соответствующие участки раковой ткани будут окрашены и видны при исследовании под микроскопом.
IHC — относительно простой, недорогой и в то же время очень эффективный метод диагностики и важный инструмент для многих видов рака. Пройти иммуногистохимию в Москве можно в международной клинике «Медика24».
Для чего применяют анализ ИГХ в онкологии?
Иммуногистохимия помогает решить следующие проблемы:
- Уточнить диагноз, вид и подвид злокачественной опухоли, если этого не позволяет сделать цитологическое и гистологическое исследование. Например, существует около 70 разновидностей лимфом и лейкозов. Чаще всего их диагностируют с помощью иммуногистохимии. Иногда дополнительно требуется проведение исследования.
- Выявить природу и локализацию основной опухоли, если удалось обнаружить только отдаленные метастазы, и неясно их происхождение.
- Подобрать оптимальную схему терапии. С помощью иммуногистохимического анализа можно оценить чувствительность злокачественной опухоли к тем или иным лекарственным препаратам, обнаружить «молекулярные мишени» для противоопухолевых средств.
- Оценить степень злокачественности опухолевых клеток, прогноз.
- Дифференциальная диагностика: исследование помогает отличить злокачественные опухоли от доброкачественных новообразований, неопухолевых процессов.
- Диагностировать множественные опухоли. Иммуногистохимию рака применяют, когда у пациента имеется подозрение на одновременное наличие двух и более разных типов злокачественных опухолей.
Проконсультируйтесь с отсутствующим врачом
Ожидайте звонка, мы свяжемся с вами в ближайшее время.
Зачем проводить после гистологии?
В медицинской практике известны случаи, когда ИГК используется после гистологического исследования. На это есть несколько причин. Один из них заключается в том, что окончательный диагноз поставить невозможно, поскольку раковая опухоль имеет очень неспецифическую микроскопическую структуру.
В онкологии техника играет очень важную роль, которую ни в коем случае нельзя недооценивать. Благодаря IGC врач может:
- Отнести рак к определенному типу;
- Определить, какие белки провоцируют развитие опухолевых очагов;
- Обнаружить метастазы;
- Понять, имела ли место трансформация на уровне клеток;
- Сделать прогноз;
- Решить вопрос необходимости таргетной терапии;
- Выяснить, насколько чувствительны патогенные микрообразования к терапевтическому лечению.
Виды
Существует два метода исследования IHC — прямой и непрямой.
В прямом методе используется тип молекулы — антитело. В прямом иммуноанализе используется один тип молекул — прямая молекула. Если эта патогенная частица присутствует в ткани и происходит реакция, раковая ткань окрашивается.
Наиболее часто используется непрямой тип. Здесь необходимы две ячейки. Первый начинает взаимодействовать с атипичной частицей, второй взаимодействует с образовавшимся комплексом «атипичная целлюлоза-антитело». Изменивший цвет маркер связывается со второй частицей.
Преимуществом непрямого анализа IHC является более высокая чувствительность.
Еще одним преимуществом является то, что для второго типа диагностики требуется лишь ограниченное количество молекулярного материала.
Перспективы
Проспективный IHC можно разделить на две группы:
- Обнаружение патологии;
- Лекарственная чувствительность.
Цели диагностики следующие:
- Окончательный вариант диагностического анализа;
- Уточнение степени раковой опухоли;
- Дифференцирование образований и процессов, с опухолями не связанными;
- Различение опухолевых процессов, присутствующих в организме.
Определенный потенциал в плане восприимчивости к лекарствам:
- Рецепторы стероидных гормонов;
- Белок Her2/neu;
- Рецепторы соматостатина 2А и 5 типов;
- PD-L1;
- Индекс пролиферативной активности (Ki-67);
- ALK, некоторые иные.
Иммуногистохимическое исследование
Иммуногистохимическое исследование является специфическим методом диагностики рака. Суть метода заключается в микроскопическом исследовании образцов тканей, предварительно обработанных специфическими антителами.
Раковые клетки вырабатывают специфические белки (антигены), которые могут связываться со специфическими антителами. При IHC образец ткани обрабатывается несколькими стандартными антителами, а затем исследуется под микроскопом. Антитела, связывающиеся с раковыми клетками, обладают свойством флуоресценции — способностью светиться под воздействием света определенной длины волны. Эта люминесценция позволяет обнаружить раковые клетки.
В настоящее время разработаны антитела практически ко всем опухолям.
С помощью иммуногистохимического исследования выполняется:
- определение вида и подвида опухоли;
- определение распространенности онкологического очага;
- при исследовании метастазов определяется их источник;
- оценка эффективности лечения онкозаболеваний;
- определение степени злокачественности опухоли;
- выясняется пролиферативная активность опухолей (с какой скоростью они растут).
Показания для иммуногистохимического исследования
С помощью этого метода можно исследовать любой тип ткани. Основным показанием является подозрение на раковый процесс.
Определены следующие показания для ИГХ:
- иммунофенотипирование первичных солидных (одиночных) опухолей;
- иммунофенотипирование метастазов;
- определение прогноза исхода опухолевого процесса;
- исследование рецепторов к различным гормонам;
- иммунофенотипирование лимфопролиферативных состояний;
- определение микроорганизмов.
Образцы исследуются патологоанатомом, прошедшим специальную подготовку по ИГХ. В заключении врач отметит, на какие антитела тропны ткани. Кроме того, будет описана морфологическая структура образца — какие клетки присутствуют и в каком количестве.
Обнаружение сродства тканей к определенным типичным опухолевым антителам является признаком конкретного типа рака.
